色谱工作者常会碰到这样的问题，什么时候该换色谱柱了?色谱柱的塔板数能体现色谱柱的状态吗?确定表明一支色谱柱应该“退休”的标准，从经验来看，当一支色谱柱的塔板数降低到新柱子时的百分之多少时就可以认为该色谱柱不能再使用了呢?只看塔板数作为评价色谱柱质量的指标合适吗?在您的实验室里是如何判断一根色谱柱不可以再用了呢?塔板数是一个粗略的指标，不能作为评价色谱柱的标准。通常使用塔板数来考察色谱系统：将新柱子接到仪器上，根据色谱柱生产商提供的测试条件测试该色谱柱，你应该得到和分析报告上同...

一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器验证。2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端或检测器末端，是可以补救的，切去柱断裂部分，重新安装二、前沿峰1.柱超载，减少进样量2.两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开3.样品冷凝，检查进样口...

先说说柱子能不能反冲的问题，色谱柱到底能不能反冲?如果色谱柱两端的筛板孔径相同反冲是不会有什么问题的，从填料流失的角度来说，粒径为5um，而筛板孔径为2um，这种情况下正冲反冲都不会造成填料的流失;此外，从柱子装填的角度来说，装柱时是按照与柱身箭头相反的方向装填的，与反冲时的液体流路方向相同，装柱时那么高的压力(通常大于40MPa)下用顶替液冲刷都没有问题，难道区区1ml/min流速下的十几个MPa会造成柱床松动?更何况反冲时通常用的要么是90%水、要么是90%或纯的有机相，...

在色谱分析域中，允许实验室出于提高检测性能与效率的需要，对标准方法或方法中规定的仪器操作条件进行调整，但不能超出一定的规定。超出一定的调整都视为方法变动。1、HPLC流动相的pH值流动相制备过程中，水溶性缓冲液pH值可在标准规定值的±0.2pH单位范围内调整。2、HPLC缓冲液中盐的浓度流动相制备过程中，如果pH值变化满足要求，则水溶性缓冲液中盐浓度可在±10%范围内调整。3、HPLC流动相中各组分的比例流动相中组分的增减可以达到该组分在组成中所占...

高效液相色谱系统一般由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等。一、高压输液泵泵的种类很多，按输液性质可分为恒压泵和恒流泵；恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。恒压泵受柱阻影响，流量不稳定；螺旋泵缸体太大，这两种泵已被淘汰。目前应用最多的是柱塞往复泵。二、进样器高效液相色谱早期使用隔膜和停流进样器，装在色谱柱入口处。现在大...

氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中，但也有例外，像安捷伦的氨基柱保长期保存要保存在纯乙腈中，具体哪个厂家的柱子的保存方法要看柱子的说明书，根据要求来保存。说一下氨基柱的使用注意事项。1.正相使用1.1新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相...

1.流动相溶剂应选择HPLC的溶剂或依此为标准的溶剂。流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气，清除微粒和灰尘。在送液泵内，为了防止杂物（固体）进入流路，装有吸滤器，但网孔径为10μm，比此更小的颗粒仍然可通过，这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此，建议常用0.45μm滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气，如不脱气，在溶剂混合时，或压力温度变化时容易产生大量气泡，会导致泵误动作和输液不畅，检测器产生噪声信号等。2.流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时，流动相在恢复到室温前，基...